PCR, se reyaksyon an chèn polymerase, ki refere a adisyon nan dNTP, Mg2 +, faktè elongasyon ak faktè amelyorasyon anplifikasyon nan sistèm nan anba kataliz la nan ADN polymerase, lè l sèvi avèk ADN paran an kòm yon modèl ak primè espesifik kòm pwen an kòmanse nan ekstansyon , Atravè etap sa yo nan denaturasyon, rkwir, ekstansyon, elatriye, pwosesis la nan vitro replike ADN pitit fi strand konplemantè ak ADN modèl strand paran an ka byen vit epi espesyalman anplifye nenpòt ADN sib nan vitro.
1. Hot Start PCR
Tan an kòmanse nan anplifikasyon nan PCR konvansyonèl se pa mete machin nan PCR nan machin nan PCR, ak Lè sa a, pwogram nan kòmanse anplifye.Lè konfigirasyon sistèm lan fini, anplifikasyon an kòmanse, ki ka lakòz anplifikasyon ki pa espesifik, ak PCR cho-start ka rezoud pwoblèm sa a.
Ki sa ki PCR kòmanse cho?Apre yo fin prepare sistèm reyaksyon an, modifye anzim la lage nan tanperati ki wo (anjeneral pi wo pase 90 ° C) pandan etap chofaj inisyal la nan reyaksyon an oswa etap "cho kòmanse", pou ke ADN polymerase la aktive.Tan deklanchman egzak la ak tanperati depann de nati ADN polymerase a ak modifye cho-start la.Metòd sa a sitou itilize modifye tankou antikò, ligand afinite, oswa modifye chimik pou anpeche aktivite ADN polymerase.Depi aktivite ADN polymerase anpeche nan tanperati chanm, teknoloji demaraj cho bay gwo konvenyans pou prepare plizyè sistèm reyaksyon PCR nan tanperati chanm san yo pa sakrifye espesifik reyaksyon PCR yo.
2. RT-PCR
RT-PCR (Reverse transcription PCR) se yon teknik eksperimantal pou transkripsyon ranvèse soti nan mRNA nan cDNA epi sèvi ak li kòm yon modèl pou anplifikasyon.Pwosedi eksperimantal la se ekstrè RNA total nan tisi oswa selil an premye, sèvi ak Oligo (dT) kòm yon jadendanfan, sèvi ak transkriptaz ranvèse pou fè sentèz cDNA, ak Lè sa a, sèvi ak cDNA kòm yon modèl pou anplifikasyon PCR pou jwenn jèn sib la oswa detekte ekspresyon jèn.
3. Fluoresan PCR quantitative
PCR quantitative fluorescent (PCR Quantitative an tan reyèl,RT-qPCR) refere a metòd pou ajoute gwoup fliyoresan nan sistèm reyaksyon PCR la, lè l sèvi avèk akimilasyon siyal fliyoresan pou kontwole tout pwosesis PCR la an tan reyèl, epi finalman lè l sèvi avèk koub estanda a pou analize quantitativeman modèl la.Metòd qPCR yo itilize souvan gen ladan SYBR Green I ak TaqMan.
4. nich PCR
Nich PCR refere a itilizasyon de seri primar PCR pou de jij anplifikasyon PCR, ak pwodwi anplifikasyon dezyèm tou se fragman jèn sib la.
Si yon dezakò nan premye pè premye (primer ekstèn) lakòz yon pwodwi ki pa espesifik yo dwe anplifye, posibilite pou menm rejyon an ki pa espesifik ke yo rekonèt pa dezyèm pè a nan premye ak kontinye anplifye se piti anpil, kidonk anplifikasyon pa dezyèm pè primè yo, yo te amelyore espesifikasyon PCR la.Youn nan avantaj nan fè de jij nan PCR se ke li ede yo anplifye ase pwodwi soti nan ADN kòmanse limite.
5. Aterisaj PCR
Touchdown PCR se yon metòd pou amelyore espesifik reyaksyon PCR pa ajiste paramèt sik PCR yo.
Nan PCR touchdown, tanperati a annealing pou premye sik yo mete kèk degre pi wo pase tanperati a annealing maksimòm (Tm) nan primè yo.Pi wo tanperati rkwir ka efektivman redwi anplifikasyon ki pa espesifik, men an menm tan an, pi wo tanperati rkwit pral agrave separasyon primè ak sekans sib, sa ki lakòz pwodiksyon PCR redwi.Se poutèt sa, nan premye sik yo, tanperati a annealing anjeneral mete diminye pa 1 ° C pou chak sik ogmante kontni an nan jèn nan sib nan sistèm nan.Lè tanperati a recuit bese nan tanperati a pi gwo, se tanperati a recuit konsève pou sik ki rete yo.
6. PCR dirèk
PCR dirèk refere a anplifikasyon ADN sib ki soti dirèkteman nan echantiyon an san yo pa bezwen izolasyon ak pirifikasyon asid nikleyik.
Gen de kalite PCR dirèk:
metòd dirèk: pran yon ti kantite echantiyon epi ajoute li dirèkteman nan PCR Master Mix pou idantifikasyon PCR;
metòd krak: apre echantiyon echantiyon an, ajoute li nan lysate la, lyse lage genomic a, pran yon ti kantite lysed supernatant epi ajoute li nan PCR Master Mix, fè idantifikasyon PCR.Apwòch sa a senplifye workflow eksperimantal la, diminye tan pratik, epi evite pèt ADN pandan etap pirifikasyon yo.
7. SOE PCR
Gen splicing pa PCR ekstansyon sipèpoze (SOE PCR) sèvi ak primè ak pwent konplemantè pou fè pwodwi PCR fòme chèn sipèpoze, se konsa ke nan reyaksyon anplifikasyon ki vin apre a, atravè ekstansyon chenn yo sipèpoze, diferan sous teknik nan ki fragman anplifye yo sipèpoze. epi kole ansanm.Teknoloji sa a kounye a gen de direksyon aplikasyon prensipal: konstriksyon jèn fizyon;mitasyon ki dirije sou sit jèn.
8. IPCR
Inverse PCR (IPCR) sèvi ak primè konplemantè ranvèse pou anplifye fragman ADN lòt pase de primè yo, epi anplifye sekans enkoni sou tou de bò yon fragman ADN li te ye.
IPCR te okòmansman fèt pou detèmine sekans rejyon enkoni adjasan yo, epi yo itilize sitou pou etidye sekans pwomotè jèn yo;onkojenik kwomozòm reyaji, tankou fizyon jèn, translokasyon ak transpozisyon;ak entegrasyon jèn viral, yo souvan itilize tou kounye a Pou mutajenèz ki dirije sou sit, kopye yon plasmid ki gen mitasyon an vle.
9. dPCR
Digital PCR (dPCR) se yon teknik pou quantification absoli nan molekil asid nikleyik.
Kounye a genyen twa metòd pou quantification molekil asid nikleyik.Fotometri baze sou absòbe molekil asid nikleyik;an tan reyèl fluoresan PCR quantitative (Real Time PCR) baze sou valè Ct, ak valè Ct refere a nimewo sik ki koresponn ak valè fluoresans ki ka detekte;PCR dijital se dènye teknoloji Quantitative ki baze sou metòd PCR yon sèl molekil pou konte quantification asid nikleyik se yon metòd quantitative absoli.
Tan pòs: Jun-13-2023