Itilizasyon ak prekosyon nan tib santrifij ultrafiltrasyon
1) Chwazi yon tib ultrafiltrasyon apwopriye.Remake byen ke manbràn UF diferan nan nivo tolerans yo nan divès pwodwi chimik yo.Tipikman, tib ultrafiltrasyon ak yon koupe pwa molekilè 10 kDa ka chwazi ak yon koupe pwa molekilè ki pa ta dwe pi gran pase 1/3 nan pwa molekilè nan pwoteyin nan enterè a, tankou 35 kDa.Si pwa molekilè pwoteyin ki enterese a se anviwon 10 kd, yo ka itilize yon tib ultrafiltrasyon ki gen yon koupe pwa molekilè 3 kd.
(2) Ultrafiltrasyon an, frèch achte, sèk, ak dlo ultrapure te ajoute anvan ou itilize ak dlo konplètman pase nan manbràn, beny glas oswa frijidè pre refwadi pou kèk minit.Lè sa a, dlo a vide, sa vle di likid la pwoteyin, ak konbyen yo ajoute, kèlkeswa sa ki pa plis pase liy blan an nan tèt tib la.Operasyon an se limyè, ak tib ultrafiltrasyon an bezwen prerefroidi sou glas anvan ou ajoute solisyon an pwoteyin.
3) Tou de mas la ak sant gravite a te rive nan balans lan.Remake byen vitès wotasyon an ak akselerasyon yo pa trè vit, otreman dirèkteman domaje manbràn ultrafiltrasyon an.Santrifij ultrafiltrasyon te kòmanse (santrifujeur precooled a 4 degre).Apre RPM diferan santrifujeur yo te konvèti nan g, li te diferan.Akselerasyon santrifij la te ajiste nan yon minimòm, diminye presyon an sou manbràn la.Remake byen, asire w ke ou kite santrifij la apre santrifij la te rive nan vitès destinasyon li, oswa si ou gen yon pwoblèm, ou pa ka okipe li pou premye fwa.Oryantasyon an nan manbràn nan file koton an te ajiste selon enstriksyon yo (ka santrifijeur angilè se manbràn aks pèpandikilè).Nan itilizasyon pratik, vitès wotasyon jeneral la pi ba pase sa ki nan enstriksyon yo, pou lavi tib santrifij la ka pwolonje.
3) Tou de mas la ak sant gravite a te rive nan balans lan.Remake byen vitès wotasyon an ak akselerasyon yo pa trè vit, otreman dirèkteman domaje manbràn ultrafiltrasyon an.Santrifij ultrafiltrasyon te kòmanse (santrifujeur precooled a 4 degre).Apre RPM diferan santrifujeur yo te konvèti nan g, li te diferan.Akselerasyon santrifij la te ajiste nan yon minimòm, diminye presyon an sou manbràn la.Remake byen, asire w ke ou kite santrifij la apre santrifij la te rive nan vitès destinasyon li, oswa si ou gen yon pwoblèm, ou pa ka okipe li pou premye fwa.Oryantasyon an nan manbràn nan file koton an te ajiste selon enstriksyon yo (ka santrifijeur angilè se manbràn aks pèpandikilè).Nan itilizasyon pratik, vitès wotasyon jeneral la pi ba pase sa ki nan enstriksyon yo, pou lavi tib santrifij la ka pwolonje.
(4) Lè konsantre nan 1ml ki rete a, pran 50ul nan solisyon tanpon, ajoute 10ul nan koule nan epi wè si gen nenpòt koulè ble, kòm yon jijman si tib ultrafiltrasyon an manke pwoteyin.Si tib la koule, re vide kouch siperyè a ak koule nan yon nouvo tib pou kòmanse ultrafiltrasyon.Pou detèmine egzakteman si tib yo te rate, santrifije pou 10min ak 5mgml BSA anvan koule, kouri sou lakòl pwoteyin, oswa tès Bradford brit, epi kontinye lè w ajoute rès solisyon an pwoteyin konsantre (ki opere sou glas epi anpeche pwoteyin soti nan chofaj) jiskaske tout konsantre yo te ajoute.Pran swen pandan santrifijasyon si presipitasyon nan pwoteyin rive, ki mennen nan fèmti tib.Si presipitasyon rive, detèmine si kòz presipitasyon an se yon konsantrasyon pwoteyin twòp oswa yon tanpon ki pa apwopriye;Ansyen an ka rezoud pa ultrafiltrasyon nan tib ultrafiltrasyon miltip an menm tan, diminye konsantrasyon an, ak lèt la pa echanj solisyon tanpon diferan jiskaske pa gen okenn presipitasyon nan pwoteyin nan rive.
(4) Lè konsantre nan 1ml ki rete a, pran 50ul nan solisyon tanpon, ajoute 10ul nan koule nan epi wè si gen nenpòt koulè ble, kòm yon jijman si tib ultrafiltrasyon an manke pwoteyin.Si tib la koule, re vide kouch siperyè a ak koule nan yon nouvo tib pou kòmanse ultrafiltrasyon.Pou detèmine egzakteman si tib yo te rate, santrifije pou 10min ak 5mgml BSA anvan koule, kouri sou lakòl pwoteyin, oswa tès Bradford brit, epi kontinye lè w ajoute rès solisyon an pwoteyin konsantre (ki opere sou glas epi anpeche pwoteyin soti nan chofaj) jiskaske tout konsantre yo te ajoute.Pran swen pandan santrifijasyon si presipitasyon nan pwoteyin rive, ki mennen nan fèmti tib.Si presipitasyon rive, detèmine si kòz presipitasyon an se yon konsantrasyon pwoteyin twòp oswa yon tanpon ki pa apwopriye;Ansyen an ka rezoud pa ultrafiltrasyon nan tib ultrafiltrasyon miltip an menm tan, diminye konsantrasyon an, ak lèt la pa echanj solisyon tanpon diferan jiskaske pa gen okenn presipitasyon nan pwoteyin nan rive.
(5) Premye etap yo itilize pou konsantre pwoteyin lan, epi si yo dwe chanje tanpon an, dousman ajoute nouvo tanpon (ultrafiltrasyon atravè yon manbràn ultrafiltrasyon 0.22um) nan apeprè 1ml pwoteyin total, epi rekonsantre nan apeprè 1ml pou twa. fwa youn apre lòt, ak final la konsantre volim final depann sou konsantrasyon an pwoteyin vle, jeneralman pa plis pase 500ul, men tou, nan 200ul.Reyalize 1000 × oswa plis nan twa okazyon, esansyèlman otan chanjman tanpon, jan yo kalkile pa omwen 10 × oswa konsa anrichisman volim chak fwa.
(5) Premye etap yo itilize pou konsantre pwoteyin lan, epi si yo dwe chanje tanpon an, dousman ajoute nouvo tanpon (ultrafiltrasyon atravè yon manbràn ultrafiltrasyon 0.22um) nan apeprè 1ml pwoteyin total, epi rekonsantre nan apeprè 1ml pou twa. fwa youn apre lòt, ak final la konsantre volim final depann sou konsantrasyon an pwoteyin vle, jeneralman pa plis pase 500ul, men tou, nan 200ul.Reyalize 1000 × oswa plis nan twa okazyon, esansyèlman otan chanjman tanpon, jan yo kalkile pa omwen 10 × oswa konsa anrichisman volim chak fwa.
Tan poste: Nov-09-2022